常規(guī)的質(zhì)粒抽提試劑盒并不適用于BAC/PAC/P1等大型質(zhì)粒DNA的抽提。這主要是因為大型質(zhì)粒DNA分子量很大,常常會超過100kb。使用常規(guī)的抽提試劑盒不但產(chǎn)量低而且會打斷這些大分子量的質(zhì)粒DNA。該試劑盒將采用經(jīng)典堿裂解法和硅膠柱純化技術,硅膠柱在獨特的結合緩沖液中能高效地回收大片段質(zhì)粒DNA的同時,減少質(zhì)粒斷裂的可能性。
小提試劑盒適合于從1-5ml細菌培養(yǎng)液中純化大分子量的質(zhì)粒載體,或各種BAC,PAC,粘粒,Cosmid等載體。細菌收集后,加入Buffer T1/T2裂解,再加入Buffer T3離心沉淀去除蛋白質(zhì)和染色體DNA,在得到的上清液中加入獨特的結合液并轉移至結合柱進一步去除蛋白質(zhì),經(jīng)過簡單的兩次洗滌即可得到高純度的BAC/PAC/P1等大片段質(zhì)粒DNA。